非洲绿猴肾Vero细胞

基本信息

中文名称：非洲绿猴肾细胞

细胞简称：Vero

细胞别称：VERO; Verda reno

细胞形态：上皮细胞样

生长特性：贴壁细胞

培养方案A(默认)生长培养基：DMEM＋10% FBS（Cell-Box CF-02S/AUS-01S）＋1%P/S

培养条件：气相：空气，95%；CO2，5%；温度：37℃

冻存条件：70% 基础培养基+20%FBS（Cell-Box CF-02S/AUS-01S）+10%DMSO

液氮保存

传代步骤：1.吸出原培养液；

2.加入2mL左右PBS，轻轻晃动培养瓶润洗细胞,吸出PBS丢弃；

3.加入1mL左右0.25%胰蛋白酶溶液（含EDTA），轻轻晃动培养瓶使之浸润所有细胞；

4.放入培养箱消化2-3min，显微镜下看到细胞块中间的细胞明显变圆有间隙时可终止；

5.加入5mL含血清的培养基终止消化，吹打细胞使之脱壁并在液体里反复吹打使细胞尽量呈单颗细胞的悬浮液；

6.收集细胞悬液离心，1000rpm/min 3-5分钟，离心完吸出上清丢弃；

7.加入新鲜培养基，轻轻吹打混匀细胞即可，按比例接种到新培养瓶，补足培养基，拧松瓶盖或使用透气瓶盖进行培养。

传代比例（密度）：1:3

换液频次：2-3/周

收货注意事项：

（1）收到细胞后先不开瓶盖，请及时核对培养瓶上标注的细胞名称是否与订购的细胞名称一致以及培养瓶是否有破损或漏液异常情况。若没有发现漏液、污染等异常情况，瓶身擦拭酒精后放在培养箱中静置1-2小时稳定细胞状态。镜下观察，有条件的情况下拍照，之后请尽快传代培养。如果当天无法操作，请常温(约25°)放置，第二天及时操作。

（2）收到细胞后若发现存在细胞脱落现象:请将培养瓶中所有培养液收集至离心管，离心(1000rpm，5min)，弃上清，加1ml的0.25%胰酶于离心管中，轻轻吹打，重悬，作用2-3分钟后，加3-6ml完全培养基中止反应。再离心，去上清，加1-3ml完全培养基重悬。仍然贴壁的细胞，按照以上描述的常规方法加入胰酶消化。最后将消化好的脱落细胞和贴壁细胞混合，按比例接种到新的T25培养瓶中即可。

培养注意事项：

不同胰酶品牌消化时间不同，注意控制胰酶消化时间，避免消化过长或过短导致细胞状态不佳。

参考文献：

1.British Pharmacopoeia Commission Tests for microbial contamination. London, UK:British Pharmacopoeia Commission;British Pharmacopoeia Appendix XVI B, 2003 Didier ES, et al.

2.Characterization of Encephalitozoon (Septata) intestinailis isolates cultured from nasal mucosa and bronchoalveolar lavage fluids of two AIDS patients. J. Eukaryot. Microbiol. 43: 34-43, 1996.

特殊情况：

1.若培养瓶或者冻存管出现破碎或漏液情况，及时拍照联系销售反馈，按指导进行进一步处理。若只是外包装破损一般不影响培养瓶和冻存管，请放心使用。

2.显微镜下观察细胞状态。先不要打开培养瓶盖，将细胞置于细胞培养箱内静置培养2-4小时，以便稳定细胞状态。

3.请仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息（如贴壁特性（贴壁/悬浮）、细胞形态、所用基础培养基、血清比例、所需细胞因子、传代比例、换液频率等)。

4.建议细胞培养传代时，定期拍照并记录细胞生长状态，所拍照将作为后续技术服务依据。